根据患者以往的病史，临床表现和体征，诊断分泌性中耳炎一般不难，必要时可通过无菌操作下进行诊断性鼓膜穿刺抽液确诊。分泌性中耳炎应与以下疾病相鉴别。
鼻咽部肿瘤：对顽固性单侧分泌性中耳炎成人患者，应详细询问其与鼻咽部肿瘤有关的病史，要特别警惕鼻咽癌的可能。所以细致检查鼻咽部应该建议作为分泌性中耳炎的常规检查。
前庭外淋巴漏：患者大多有中耳损伤史或镫骨手术史，往往伴有眩晕症状。必要时应抽出中耳积液进行化验，通过明确液体性质而确诊前庭外淋巴漏。
脑脊液耳漏：患者因颞骨骨折或颅底骨折伴有脑脊液漏，但鼓膜无损害，因为脑脊液聚积在鼓室内，所以产生类似分泌性中耳炎的临床症状。
明确的头部外伤史、颞骨X线、颞骨骨折的阳性体征、CT检查和中耳积液化验结果均有助于确诊。
粘连性中耳炎：症状与分泌性中耳炎相似，但病史一般较长，听力损失较重且咽鼓管吹张没有改善，鼓膜紧张部萎缩并与听骨链、鼓室内壁粘连。鼓膜像和CT检查无鼓室积液改变。
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