慢病毒上清在4°C环境下通常可保存72小时，实际保存时间受病毒滴度、保存容器密封性、反复冻融次数、添加剂成分及初始污染风险等因素影响。
高滴度慢病毒上清因载体浓度较高，稳定性相对更好。实验数据显示，滴度超过1×10^8TU/mL的样本在4°C降解速率显著低于低滴度样本，但超过96小时后活性仍可能下降30%以上。
使用无菌螺口冻存管或带硅胶垫的EP管能有效隔绝空气氧化。普通离心管因密封性不足，可能导致培养基蒸发和pH值变化，使病毒半衰期缩短至48小时内。
冻融会破坏病毒包膜结构，经3次以上冻融的样本在4°C存放时，24小时内滴度可能衰减50%。建议分装为单次用量，避免反复冻融。
添加5%甘油或1%人血清白蛋白可维持病毒稳定性。含EDTA等螯合剂的保存液可能干扰后续转染实验，需根据下游应用选择添加剂。
制备过程中支原体或细菌污染会加速病毒失活。无菌检测阳性的样本即使在4°C保存，24小时后滴度衰减可达80%，需立即处理或丢弃。
为最大限度保持病毒活性，建议将慢病毒上清分装至无菌冻存管，每管标注滴度、制备日期及批次号，添加适宜保护剂后置于-80°C长期保存。短期使用时优先采用预冷离心机处理样本，操作全程保持冰上环境。转染前需检测滴度，活性低于初始值60%时应重新制备。实验人员需佩戴防护装备，避免气溶胶暴露，废弃物料需经121°C高压灭菌处理。
