睾酮测定主要包括血清总睾酮测定、游离睾酮测定、唾液睾酮测定、尿睾酮测定和生物可利用睾酮测定等方法。
血清总睾酮测定是临床最常用的检测方法，通过抽取静脉血测量血液中与性激素结合球蛋白和白蛋白结合的睾酮总量。该检测适合评估男性性腺功能减退、女性高雄激素血症等疾病，需在上午8-10点采血以减少昼夜波动影响。检查前需避免剧烈运动和药物干扰。
游离睾酮测定检测未被蛋白质结合的活性睾酮比例，能更准确反映生物活性。常用平衡透析法或计算法间接测量，适用于性激素结合球蛋白异常升高或降低的情况，如肥胖、肝病、甲状腺疾病患者的性功能评估。该方法对实验室技术要求较高。
唾液睾酮测定通过采集唾液样本检测，其浓度与血清游离睾酮呈正相关。具有无创、可重复取样等优势，适用于运动医学研究、压力激素监测等领域。但受唾液分泌量、采样时间等因素影响，需规范采样流程以提高准确性。
尿睾酮测定通过24小时尿液收集评估睾酮代谢产物，反映一段时间内的睾酮分泌总量。主要用于体育竞技中的兴奋剂检测，以及某些先天性肾上腺增生症的诊断。检测结果易受肾功能和尿液收集完整度影响。
生物可利用睾酮包括游离睾酮和与白蛋白疏松结合的睾酮，采用硫酸铵沉淀法测定。该指标对老年男性雄激素缺乏评估更有价值，能规避性激素结合球蛋白变化的干扰。临床常用于男性更年期综合征的诊断与治疗监测。
进行睾酮检测前应保持规律作息，避免熬夜和剧烈运动。女性检测需注明月经周期阶段，部分药物如激素制剂需停药3-7天。若检测结果异常，建议结合临床表现由专科医生综合判断，必要时重复检测或补充促性腺激素、染色体等其他检查。日常保持适度运动、均衡营养和规律作息有助于维持正常睾酮水平。
